【MK-1775】- 作用 - 生物活性 - 靶點活性

發布時間:2018-12-06 20:40:12 編輯作者:活性達人

2-烯丙基-1-(6-(2-羥基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-6-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基氨基)-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3(2h)-酮圖片

圖片:2-烯丙基-1-(6-(2-羥基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-6-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基氨基)-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3(2h)-酮結構式

MK-1775,別名AZD1775或者Adavosertib,它是酪氨酸激酶WEE1的小分子抑制劑(IC50:5.2nM,無細胞試驗中); 阻礙G2 DNA損傷檢查點。MK-1775選擇性地靶向并抑制WEE1,酪氨酸激酶磷酸化細胞周期蛋白依賴性激酶1(CDK1,CDC2)以使CDC2 /細胞周期蛋白B復合物失活。它的化學中文名是2-烯丙基-1-(6-(2-羥基丙烷-2-基)吡啶-2-基)-6-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基氨基)-1h-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3(2h)-酮。那么它的生物活性是什么?如何做實驗呢?下面讓小編給您詳細說明。

首先我們介紹MK-1775的生物活性:

1)體外活性
MK-1775增強了5-FU對p53缺陷型人結腸癌細胞的細胞毒作用。MK-1775抑制細胞中CDC2 Y15的磷酸化,消除由5-FU處理誘導的DNA損傷檢查點,并通過誘導組蛋白H3磷酸化導致有絲分裂的過早進入[1]。MK-1775在p53缺陷細胞中消除了輻射誘導的G2阻滯,但在p53野生型細胞系中沒有[2]。與p53缺陷腫瘤中的吉西他濱治療相比,吉西他濱與MK-1775的組合產生強大的抗腫瘤活性并顯著增強腫瘤消退反應(4.01倍)[3]。

2)體內活性
在體內,MK-1775以可耐受的劑量增強5-FU或其前藥卡培他濱的抗腫瘤功效[1]。MK-1775(每天兩次60mg / kg,p.o。)增強H1299異種移植腫瘤對分次放療的反應[2]。與GEM處理的小鼠相比,MK-1775(30mg / kg,p.o。)使PANC198,PANC215和PANC185中的腫瘤生長退化[3]。

我們已經了解了MK-1775的生物活性,接下來如何做活性實驗呢?一般來說,有如下的三種方法:

1)細胞實驗
使用含有50 mM HEPES(pH 7.9),0.4 mol / L NaCl和1 mM EDTA的裂解液從細胞沉淀中提取總蛋白,并用10μL/ mL磷酸酶抑制劑混合物1,10μL/ mL磷酸酶抑制劑混合物強化 2,10μL/ mL蛋白酶抑制劑和1%NP-40。通過Bio-Rad蛋白質測定法測定裂解物的蛋白質濃度。通過12%SDS-PAGE分離等量的蛋白質并轉移至Immobilon膜。

膜上的非特異性結合位點在含有0.1%吐溫(TBS-T)的Tris(20mM) - 緩沖鹽水(150mM,pH7.4)中的5%脫脂奶粉中封閉。通過將膜在5%脫脂奶粉中的一抗中的膜在4℃溫育過夜,然后在合適的過氧化物酶綴合的二抗中孵育45分鐘來檢測蛋白質信號。然后通過在Typhoon 9400掃描儀上使用ECL加Western Blotting Detection Reagents的增強化學發光來顯影膜。

2)動物實驗
通過在10μL中接種1×106Calu-6細胞在腿中產生腫瘤異種移植物。當腫瘤直徑達到8mm并持續5天時,開始照射和MK-1775治療。使用由兩個平行相對的137Cs源組成的小動物輻照器以5Gy / min的劑量率將γ射線局部遞送至未麻醉小鼠的荷瘤腿。每天兩次照射腫瘤,間隔6小時。在第一次每日輻射劑量之前1小時和之后2小時,通過管飼法給予MK-1775 0.1mL體積。

3)激酶實驗
體外激酶測定:使用重組人Wee1。在增加濃度的MK-1775存在下,在30℃下,用10μMATP,1.0μCi[γ-33P] ATP和2.5μg聚(Lys,Tyr)作為底物進行激酶反應30分鐘。將摻入基質中的放射性捕獲在MultiScreen-PH板上,并在液體閃爍計數器上計數。

今天介紹了MK-1775的作用,并且詳細地說明了它的生物活性和實驗方法。綜上所述,MK-1775 是一種有效的 Wee1 抑制劑,IC50 值為 5.2 nM。它的靶點活性是Wee1,5.2nM。

您可能想了解MK-1775的物理化學性質https://www.chemsrc.com/cas/1177865-17-6_452613.html。如果您有其他資訊方面的需求,請和化源網聯系。

參考文獻:
[1]. Hirai H, et al. MK-1775, a small molecule Wee1 inhibitor, enhances anti-tumor efficacy of various DNA-damaging agents, including 5-fluorouracil Cancer Biol Ther. 2010 Apr;9(7):514-22.
[2]. Bridges KA, et al. MK-1775, a novel Wee1 kinase inhibitor, radiosensitizes p53-defective human tumor cells. Clin Cancer Res. 2011 Sep 1;17(17):5638-48. Epub 2011 Jul 28.
[3]. Rajeshkumar NV, et al. MK-1775, a potent Wee1 inhibitor, synergizes with gemcitabine to achieve tumor regressions, selectively in p53-deficient pancreatic cancer xenografts.Clin Cancer Res. 2011 May 1;17(9):2799-806. Epub 2011 Mar 9.

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