PF-477736的作用 - 生物活性 - 靶點活性

發布時間:2018-12-03 21:27:28 編輯作者:活性達人

PF 477736圖片

圖片:PF 477736結構式

PF-477736是一種特異的,有效的ATP競爭性Chk1抑制劑(Ki:0.49 nM),還抑制FGFR3,Aurora-A,VEGFR2,Flt3,Fms(CSF1R),Ret和Yes。那么它的生物活性是什么?如何做實驗呢?下面讓小編給您詳細說明。

首先我們介紹PF-477736的生物活性:

1)體外活性
PF-477736(128nM)在CA46和HeLa細胞中以劑量依賴性方式消除喜樹堿誘導的DNA損傷檢查點。PF-477736有效地消除了吉西他濱誘導的S期阻滯,HT29細胞中凋亡細胞群的相應增加。PF-477736(540nM)在HT29細胞中以時間和劑量依賴性方式增強吉西他濱誘導的細胞毒性。在MTT測定中,PF-477736增強了一組化學治療劑在廣譜p53缺陷型人癌細胞系中的生長抑制活性。

向吉西他濱阻滯細胞添加PF-477736(360nM)誘導H2AX磷酸化強度的顯著增加,反映了DNA損傷位點附近的更多數量的γ-H2AX分子。[1] PF-477736(0.5 nM)在HL-60細胞中在姜黃素存在下選擇性地阻斷p73和P53磷酸化。[2] PF-477736(360 nM)抑制多西紫杉醇誘導的組蛋白H3(Ser10)和Cdc25C(Ser216)的磷酸化,并加強COLO205細胞的凋亡。[3] PF-477736(250 nM)與MK-1775結合在OVCAR-5細胞中具有顯著的協同細胞毒活性。

PF-477736(250nM)與MK-1775結合導致OVCAR-5細胞中DNA含量在2N和4N之間的細胞積累。PF-477736(250 nM)與MK-1775結合導致DNA復制結束前的過早有絲分裂,受損的DNA導致OVCAR-5細胞中的凋亡細胞死亡。[4]

2)體內活性
PF-477736(4mg / kg i.v.)導致大鼠的終末半衰期(T1 / 2)為2.9小時,AUC為5.72μg/ hr / mL,CLp為11.8mL / min / kg。PF-477736劑量依賴性地增強Colo205異種移植小鼠模型中最大耐受劑量的吉西他濱的抗腫瘤活性。PF-477736(12mg / kg)誘導Colo205異種移植小鼠模型中組蛋白H3(Ser10)和磷酸 - 組蛋白H2AX的磷酸化增加。[1]

PF-477736(15mg / kg i.p.)在COLO205和MDA-MB-231異種移植模型中增強多西紫杉醇誘導的腫瘤生長抑制和腫瘤生長延遲。[3] PF 477736(10mg / kg,每天一次i.p.)與MK-1775(30mg / kg,每天兩次口服)組合,導致攜帶OVCAR-5異種移植物的小鼠中更大的腫瘤生長抑制。[4]

我們已經了解了PF-477736的生物活性,接下來如何做活性實驗呢?一般來說,有如下的三種方法:

1)細胞實驗
IC50測定法測量PF-477736對p53缺陷型人癌細胞系的抗增殖作用。將每個細胞系中的細胞以指數增長的密度接種在完全培養基中的96孔測定板中并使其附著16小時。然后進行PF-477736的系列稀釋,并向每個板中加入適當的對照。將細胞與藥物一起孵育96小時。溫育后,將在完全培養基中稀釋的MTT工作原液加入每個孔中,并將細胞溫育4小時。離心并除去上清液后,向各孔中加入DMSO,在SpectraMax平板讀數器上在540nm處讀板。

2)動物實驗
化學治療劑或PF 477736(PF-00477736)通過腹膜內施用。當腫瘤在指定的治療方案中體積為100至150mm 3時進行注射。吉西他濱在一系列劑量下給藥,包括小鼠的最大耐受劑量(MTD),根據每3天一次進行四次治療(q3d×4)時間表。PF477736在吉西他濱后24小時開始根據q3d×4方案在一系列劑量(4-60mg / kg)下施用??紤]到對i.p.的行為反應的嚴重性,PF 477736的MTD被確定為40mg / kg。給藥和體重減輕5%至10%。對于細胞毒性藥物,MTD的平均體重減輕的發生率為5%~10%[1]。

3)激酶實驗
結合試驗:該試驗在96孔板中在30℃下在含有50mM TRIS pH 7.5,0.4M NaCl,4mM PEP,0.15mM NADH,28單位乳酸脫氫酶的0.1mL試驗緩沖液中進行20分鐘/ mL,16單位丙酮酸激酶/ mL,3mM DTT,0.125mM Syntide-2,0.15mM ATP和25mM氯化鎂。用1nM的CHK1激酶結構域開始測定。通過在不同濃度的PF-477736存在下測量初始速度來確定CHK1活性的抑制。使用Enzyme Kinetic和Excel軟件分析數據,并擬合競爭性抑制的動力學模型以獲得Ki值。通過以1μM或10μM針對約100種蛋白激酶的組2篩選化合物來評估PF-477736的激酶選擇性。

今天介紹了PF-477736的作用,并且詳細地說明了它的生物活性和實驗方法。綜上所述,PF-477736是一種有效的,ATP 競爭性的 Chk1 抑制劑,Ki 為0.49 nM,對其選擇性是Chk2 (Ki, 47 nM) 的100 倍。它的靶點活性是c-Fms,10nM(Ki);Chk1,0.49nM(Ki);Chk2,47nM(Ki);VEGFR2,8nM(Ki);Yes,14nM(Ki)。

您可能想了解PF-477736的物理化學性質https://www.chemsrc.com/cas/952021-60-2_1172726.html。如果您有其他資訊方面的需求,請和化源網聯系。

參考文獻:
1. Blasina A, et al. Mol Cancer Ther, 2008, 7(8), 2394-2404.
2. Chakraborty J, et al. J Biol Chem, 2010, 285(43), 33104-33112.
3. Zhang C, et al. Clin Cancer Res, 2009, 15(14), 4630-4640.
4. Carrassa L, et al. Cell Cycle, 2012, 11(13), 2507-2517.

相關化合物:PF 477736

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